人多能干细胞来源的小细胞外囊泡（human pluripotent stem cell-derived small extracellular vesicles，简称 hPSC-sevs）是近年来再生医学和细胞治疗领域的研究热点，以下是关于它的详细介绍：

基本概念

定义：hPSC-sevs 是由人多能干细胞（包括胚胎干细胞和诱导多能干细胞）分泌的直径通常在 30-200 纳米的小细胞外囊泡。它们携带了亲本干细胞的多种生物活性分子，如蛋白质、核酸（miRNA、lncRNA 等）、脂质等，是细胞间信息传递的重要载体。特性：具有低免疫原性、易于储存和运输、无成瘤风险等优势，克服了直接使用干细胞治疗时面临的成瘤风险和免疫排斥等问题，成为干细胞治疗的替代策略。

功能与作用

促进组织修复：可通过递送生物活性分子，激活内源性干细胞的增殖和分化，促进神经、血管、骨与软骨等组织的再生，对创伤、退行性疾病等具有修复作用。抗衰老作用：在神经性退行性疾病、糖尿病、骨关节炎、骨质疏松等衰老相关疾病中，能逆转细胞衰老，改善组织功能，延缓衰老进程。免疫调节：调节免疫细胞功能，抑制炎症反应，维持免疫稳态，对自身免疫性疾病和炎症相关疾病具有潜在治疗价值。

临床应用前景

疾病治疗：在心血管疾病、神经系统疾病、骨关节疾病、糖尿病等领域的临床前研究中展现出良好效果，部分产品已进入临床试验阶段。个性化医疗：可通过基因编辑等技术对 hPSC-sevs 进行改造，实现靶向递送和个性化治疗，提高治疗效果。

来源干细胞

本两项团体标准分别针对人多能干细胞和人间充质干细胞来源的sEVs而制定。

人多能干细胞

人多能干细胞是指具有在体外无限地自我更新和向三胚层细胞分化潜能的干细胞，包括人胚干细胞和人诱导多能干细胞。其中人胚干细胞是指源自人着床前胚胎中未分化的初始细胞；人诱导多能干细胞是指由人体细胞经重编程而获得的一种多能干细胞。用于生产sEVs的人多能干细胞的关键质量属性分别完全符合团体标准T/CSCB 0002《人胚干细胞》和T/CSCB 0005《人诱导多能干细胞》的规定。

生产sEVs的人干细胞培养体系

sEVs分离纯化自人干细胞培养上清液，因此干细胞的培养体系是生产sEVs重要的一环。其培养体系包括培养液、基质胶以及消化酶等均应采用成分明确的GMP级制剂，收获的干细胞培养上清液中不应引入其他来源的囊泡，以免影响最终收获的sEVs。

关键质量属性（CQAs）

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形态

sEVs的形态采用透射电镜的方法进行观察，获得的图像应为不聚团的具有清晰膜结构的茶托状或杯状结构，边缘清晰，在镜下对单个sEVs进行尺寸测量时，其直径应小于200nm。

粒径

sEVs的颗粒直径分布应用纳米流式仪进行检测，这一方法可以获得sEVs样本群体中单个sEVs的颗粒直径，群体的颗粒直径分布数据应在小于200nm的范围内，且在范围内存在粒径峰值。

标志蛋白

sEVs的膜表面或膜内中携带了包括CD9、CD63、CD81、LAMP1/2、TSG-101、Alix、HSP70等多种蛋白。当同时鉴定到sEVs膜表面和膜内的标志蛋白时，可以从一个方面确认sEVs的存在。本标准中选取研究中最常用的膜表面标志蛋白（CD9、CD81、CD63中的任意两个）与内部标志蛋白（TSG-101、Alix中的任意一个）表达阳性来鉴定sEVs。对于干细胞来源的sEVs的标志蛋白，蛋白印迹法是目前最通用的检测方法。

纯度

纯度是sEVs质量控制的重要指标，干细胞来源的sEVs分离自干细胞的培养上清液，制备过程中可能污染培养上清中的蛋白成分或细胞器来源的蛋白等。根据国内外学者研究结果，本标准规定了两种方式鉴定sEVs的纯度，当两种方法的结果同时达标时，我们可认定该sEVs制剂纯度合格。

sEVs阴性标志物检测

sEVs在生物发生上距离细胞核、线粒体、高尔基体、内质网等细胞器较远，sEVs中基本不表达这些细胞器的特异蛋白[2]。因此，这些细胞器的特异性蛋白的出现可作为sEVs制剂不纯的证据。高尔基体来源GM130及内质网来源蛋白Calnexin等蛋白常作为sEVs检测的阴性标志物[2]，本标准中规定GM130或Calnexin的蛋白印迹法检测结果应为阴性；

sEVs数量与蛋白量比值

研究认为在相同的蛋白浓度下，sEVs数量越高，则制剂的纯度越高[6]。根据经验总结该比值大于或等于1×108个颗粒/微克蛋白时可认为是纯度较高的sEVs。其中计算该数值的sEVs颗粒数用纳米流式仪测定，蛋白量用BCA试剂盒测定。

生物活性

用于后续研究或临床试验的sEVs应具有生物活性。因此，根据两种sEVs的特性，两项标准分别规定了针对人多能干细胞来源的sEVs与人间充质干细胞来源的sEVs的生物活性检测方法。

人多能干细胞来源的sEVs：

人多能干细胞来源的sEVs具有强大的促进血管新生、组织再生修复的作用，因此选用CCK8实验检测其对内皮细胞与成纤维细胞的促增值作用。

微生物

微生物会导致sEVs的失效或对患者造成不良反应，sEVs的生产、包装均应对常见的微生物进行检测，包括HIV、HBV、HCV、HTLV、EBV、HCMV、TP、真菌、细菌、支原体等，应严格满足相应要求。

存储与运输

储存：应在-80℃冰箱或液氮中储存，避免反复冻融

容器：使用低吸附材料容器，减少纳米级囊泡的吸附损失

运输：冻存制剂需用干冰或液氮运输；非冻存制剂在2~8℃条件下运输

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